心肌细胞中微小核糖核酸 let-7c对肌营养素基因表达的调控作用
【出 处】:
【作 者】:
王玉瑶
王玉璇
翟翔
刘铭
解军
【摘 要】目的:探讨心肌细胞中微小核糖核酸(miR)let-7c(miR-let-7c)对肌营养素基因表达是否具有调控作用以及可能的作用机制。<br> 方法:首先构建携带肌营养素基因3'非编码区(3'-UTR)片段的荧光素酶报告基因载体,与miR-let-7c前体共转染Hela细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性以验证miR-let-7c与肌营养素基因的靶向调控关系。进而培养大鼠心肌细胞H9c2,Taqman实时定量聚合酶链式反应(PCR)法检测miR转染效果,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测miR-let-7c及miR-let-7c抑制物转染心肌细胞后肌营养素蛋白表达,以及心肌肥厚相关信号通路分子核转录因子-κB(NF-κB)的活性变化。<br> 结果:荧光素酶活性实验结果表明,与重组荧光素酶报告基因表达载体(pMIR-MTPN)+ miR前体阴性对照组相比,pMIR-MTPN+ miR-let-7c前体组荧光素酶活性显著降低[(59.30±9.90)% vs (98.10±15.10)%]。Western blot结果表明,miR-let-7c前体组与miR阴性对照组相比,肌营养素蛋白表达水平显著降低[(0.28±0.05) vs (0.90±0.09)],此外,NF-κB蛋白水平显著降低[(0.25±0.06) vs (0.75±0.07)];相反,miR-let-7c抑制物组与抑制物阴性对照组相比,肌营养素蛋白表达水平显著升高[(1.14±0.09) vs(0.44±0.09)],同时,NF-κB蛋白水平也显著升高[(1.09±0.05) vs(0.71±0.06)],差异均有统计学意义(P <0.05)。<br> 结论:miR-let-7c能够通过作用于3'UTR区域,抑制肌营养素基因表达,并影响心肌肥厚关键信号通路分子NF-κB的活性。
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